實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
乳腺癌細(xì)胞；BC－027 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63676 |
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細(xì)胞名稱 乳腺癌細(xì)胞；BC－027
形態(tài)特性: 上皮樣細(xì)胞
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: BC－027乳腺癌細(xì)胞由中國(guó)人種乳腺癌組織經(jīng)培養(yǎng)選擇獲得，于2007年建立鑒定，是乳腺癌基礎(chǔ)研究和臨床研究的材料。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS；50u/ml試劑胰島素
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況: C18
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Sinoacutine
CAS No.：4090-18-0
中文名：青風(fēng)藤
分子式：C19H21NO4
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AQP0/MIP26 水通道蛋白0抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml ()Hyoscyamine
TYK2 非受體酪蛋白激酶2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Dextran D70
HRH1 組受體H1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Dextran D40
HRH2 組受體H2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Dextran D20
phosphoHRH1(Ser398) 組受體H1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Saxagliptin HCL
HOXA11 同源盒蛋白HOXA11抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml EGCG, ()Epigallocatechin gallate/Green Tea Extract
HOXA9 同源盒蛋白HOXA9抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Dasatinib Monohydrate
HOXB5 同源盒蛋白HOXB5抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Exemestane (USP)
羥基尿素 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Hydroxyurea 含量:BR，99%
羥基甾族合物還原酶 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:HSD 含量:BR，5u/ul，99%
羥甲基樹(shù)脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Hydroxymethylresin 含量:BR
鞘酯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Sphingomyelin 含量:BR，98%
親和素 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Avidin(chikeneggwhite) 含量:BR，0.1u/mg
青G鉀 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:PenicillinGPotassiumsalt 含量:BR，98%
青G 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:PenicillinGNasalt 含量:寡肽級(jí)，90%
青鏈兩性B溶液 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Penicillin&Streptomycin&AmphotericinBsolution,γIrradiated 含量:高純，90%，適合電泳
青鏈溶液 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Penicillin&Streptomycinsolution,γIrradiated 含量:金標(biāo)級(jí)，99%，可做金標(biāo)抗體
青鏈新溶液 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Penicillin&Streptomycin&Neomycinsolution,γIrradiated 含量:BR，80%
乳腺癌細(xì)胞；BC－027大腸桿菌噬菌體MS2液體培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于大腸桿菌噬菌體MS2培養(yǎng)
大豆酪蛋白消化物瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：一種通用的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基,用于各種微生物的培養(yǎng)
規(guī)格：500g用途：微生物指示劑
瓊脂規(guī)格：250g用途：用于霍亂弧菌的分離培養(yǎng)
蛋白胨規(guī)格：250g用途：用于制備0.1%蛋白胨水，用于空腸彎曲菌的預(yù)增菌
馬鈴薯液體培養(yǎng)基（含霉素）規(guī)格：250g用途：用于霉菌和酵母菌增菌培養(yǎng)
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