人脂肪干細胞永生化
根據不同來源及分化階段，干細胞可分為胚胎干細胞和成體干細胞胚胎干細胞具有分化為多種不同組織的能力，但在倫理上存在爭議。成體干細胞因其來源廣泛、增殖能力強等特點，現已成為組織工程學研究的選種子細胞。其中，脂肪干細胞作為組織工程修復的種子細胞，因其具有來源豐富、取材容易、增殖能力強等優點，正受到越來越多的關注。脂肪干細胞形態類似成纖維細胞，具有較強的增殖能力。在一定的誘導條件下，可分化為脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞、心肌細胞、上皮細胞等，具有多向分化潛能。
1) 組織來源于人的正常脂肪組織。
2) 細胞鑒定：CD44免疫熒光染色為陽性，CD45免疫熒光染色為陰性。
3) 經鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5) 細胞生長方式：長梭形細胞，不規則細胞，貼壁培養。
英文名稱 | 人脂肪干細胞永生化 | 規格 | 1×106cells |
種屬 | 人 | 生長特性 | 貼壁培養 |
細胞形態 | 長梭形細胞，不規則細胞， | 貨號 | E-XB6567 |
用途 | 僅供科研研究實驗 | 貨期 | 現貨 |
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否*揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。.觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。
6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。 收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。
9. 注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。
1)復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min(視細胞情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml*培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。
3)細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
大鼠骨細胞 | 兔韌帶成纖維細胞 |
豬腎小管上皮細胞 | 人肝實質細胞 |
豬胸腺成纖維細胞 | 羊皮膚成纖維細胞 |
豬睪丸支持細胞 | 人皮膚成纖維細胞 |
豬腎小球系膜細胞 | 小鼠室管膜細胞 |
豬膀胱上皮細胞 | 大鼠視網膜微血管周細胞 |
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